产品简介:
BCA蛋白定量法是目前常用的蛋白定量方法之一。本产品的原理是在碱性条件下,蛋白质将Cu2+还原为Cu+,Cu+与BCA试剂(Bicinchoninic Acid,二喹啉甲酸)形成紫色络合物,该络合物在562nm处有紫外吸收峰,与标准曲线对比,即可计算出待测蛋白的浓度。
BCA法快速、灵敏、稳定。以BSA(牛血清蛋白)溶液为蛋白质标准品溶液,测定范围为20~2000μg/ml。
注:
● 在低温条件或长期保存出现沉淀时,可搅拌或37℃温育使溶解,如发现细菌污染则应丢弃。
● 试剂A与试剂B用应密闭保存。
操作步骤:
A.96孔酶标板测定:
1、 BSA蛋白质标准工作液配制:用与待测蛋白样品一致的稀释液按下表稀释BSA标准品;
2、 BCA工作液配制:根据样品数量(包括BSA标准蛋白和待测蛋白样品),按照BCA试剂A和BCA试剂B体积比为50:1的比例配制适量BCA工作液,充分混匀;
例子:BSA标准样品个数为7个,待测样品为2个,每个样品重复3次。
96孔检测法所需BCA工作液总量为:
(7个BSA标准品样品+2个待测品样品)×3×0.2ml=5.4ml;
再根据BCA-A和BCA-B体积比50:1的比例计算所需量。但是由于加样过程中存在误差,建议多配2个孔的量。
3、 96孔板检测过程:
(1)将上述稀释好的BSA标准样品和待测样品各25μl分别加到作好标记的96孔板中,每个样品推荐做2-3个重复。
(2)每个孔加入200μlBCA工作液,充分混匀,盖上96孔板盖,37℃孵育30min,冷却至室温,去除气泡,在3~5min内完成检测。
(3)用酶标仪在540~590nm(建议是562nm)范围内检测96孔板中所有样品的吸光值。
(4)根据上述BSA标准品浓度和吸光值绘制标准曲线,计算待测样品蛋白浓度。
B.比色皿测定:
按照比色皿规格,与以上方法相同,适当按比例增加各溶液体积即可。
使用注意事项:
1、 由于该法检测时,吸光值会随时间延长而加深,因此,须在3~5min内完成检测,否则会影响蛋白浓度定量的准确性。
2、 建议去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
3、 使用温箱孵育时,应注意防止因水分蒸发导致的误差。
4、 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应该去除。
5、 试剂A和试剂B混合后可能会出现浑浊,充分混匀后消失。
6、 未知样品蛋白浓度可以从标准曲线方程计算得到,实际样品蛋白浓度需要乘以相应的稀释倍数。
7、 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内,请重新稀释样品后再次测定。
8、 若样品中含有较高浓度的EDTA等螯合剂,建议选用Bradford法检测。
注意事项:
1、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、 本试剂盒仅供科学研究使用,不可用于诊断或。