产品简介:
蛋白银染试剂盒(Protein Fast Silver Stain Kit)是一种比较快速的可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白银染染色的试剂盒,该试剂盒含有增敏步骤,可背景。其优点还在于:1、操作简单、快速;2、可用于2D凝胶的银染,并可进行后续的质朴检测;3、目的条带清晰;4、不含甲醇Protein Fast Silver Stain Kit与Protein Silver Stain Kit相比,前者操作速度更快,当检测灵敏度可能低于后者,尤其是在检测小分子量蛋白质的时候。本试剂盒仅用于科研领域,不宜用于临床诊断或其他用途。
自备材料:
1、 不平摇床或侧摆摇床
2、 去离子水(超纯)
3、 乙醇、冰乙酸
操作步骤(仅供参考):
1、 准备工作:以下操作以8.5×5.5cm、厚度为1.0mm的凝胶为例,以凝胶全部浸没到溶液为准,一般用量是25~50ml,对于凝胶体积较大的,各溶液的使用量需按凝胶体积比例放大。整个银染过程均应在摇床上持续摇动进行,摇床转速控制在60~70rpm。提前配制固定液,固定液A按无水乙醇:冰乙醇:去离子水=5:1:4的比例配制。提前配制洗涤液,即按无水乙醇:去离子水=1:4的比例配制。
2、 水洗:电泳结束后,取凝胶放入去离子水中,摇床上清洗2次,每次5min。
3、 固定:取凝胶放入50~100ml固定液中,在摇床上室温摇动15~20min;重复固定步骤1次。
4、 洗脱:取凝胶放入洗涤液中清洗2次,每次5min。
5、 水洗:去离子水清洗凝胶2次,每次5min。
6、 增敏:配制银染增敏工作液,即取Silver Stain Sensitizer(500×)0.1ml加入到50ml去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Sensitizer,一般应2h内用完。室温下用1×Silver Stain Sensitizer孵育凝胶2min,立即用去离子水清洗凝胶2次,每次1min。
7、 银染:配制银染显影工作液,即取Silver Stain (100×)0.5ml加入到50ml去离子水中,混匀,即得1×Silver Stain,一般应2h内用完。取凝胶入1×Silver Stain,在摇床上室温摇动10~20min。
8、 水洗:弃液,在摇床上用去离子水清洗凝胶2次,每次30s,摇动速度在60~70rpm,总的水洗时间应控制在1.5min内。
9、 显影:配制银染显影工作液,即取Silver Stain Developer(5×)10ml加入到40ml去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Developer,一般应30min内用完。清洗凝胶后,立即置于1×Silver Stain Developer中,室温孵育2~10min,直至蛋白条带清晰可见。一般显色30s后就会出现棕色沉淀,继续显影2~3min,亦可延长到5min以上,如果显影效果不佳,可重新更换1×Silver Stain Developer继续显影。
10、 迅速用去离子水清洗凝胶以避免显影过度、背景染色。立即加入银染终止液,摇床上摇动10min,以终止显色反应。(配制银染终止液,即取Silver Stain Stop Buffer(10×)10ml加入到40ml去离子水中,混匀,即1×Silver Stain Stop Buffer,一般应24h内用完。)
11、 保存:弃终止液,加入去离子水50ml,摇床上摇动2~5min,弃液。短期保存于新鲜去离子水,长期保存可以制备干胶。
注意事项:
1、 背景过深:①显色时间过长;②洗涤不充分;③凝胶中残留物质未去除干净;④去离子水的纯度过低。
2、 蛋白条带较浅:①蛋白的半胱氨酸含量过低;②银染后水洗时间过长;③蛋白量较低;④固定后的洗涤时间不够,导致乙酸残留。
3、 凝胶上出现杂质或非蛋白的印迹:①凝胶没有被充分浸没,应加入足量溶液;②容器没有清洗干净;③凝胶接触金属物质;④指纹或其他压迹。
4、 本染色液呈酸性,有轻微腐蚀性,使用时请作必要防护。
5、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。