产品简介:
双缩脲是一种用于分析蛋白质的方法,双缩脲反应的原理是在呈蓝色的碱性硫酸铜溶液存在的情况下,铜离子与肽键形成有色螯合的铜复合物,呈紫色。所产生的颜色密度与参与反应肽键数成比例。可通过比色法分析浓度,在紫外可见光谱中的波长为540nm。双缩脲法测定蛋白浓度兼容性亦很好,不受大部分样本中其他成分的影响,但易受铜离子螯合剂影响,另外,对于血清总蛋白的双缩脲分析,胆红素、脂类、血红蛋白、葡聚糖具有一定干扰作用。
双缩脲试剂(AB液)由Biuret Reagent A、Biuret Reagent B组成,如组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩试剂产生紫色反应,颜色深浅与蛋白质浓度成正比。该试剂是较为粗略的验证蛋白质存在的方法,多用于定性检测蛋白质。
操作步骤(仅供参考):
1、 先将Biuret Reagent A 30ml加入待测样品3ml,振荡均匀,以便产生碱性环境。
2、 加入2~3滴Biuret Reagent B,振荡均匀,如果组织里含有蛋白质或具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应,颜色深浅与蛋白质浓度成正比。
3、 如果想采用分光光度计或酶标仪测定,应于540nm波长处的吸光值,如无540nm,520~560nm之间的波长也可,根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。
注意事项:
1、 待测蛋白和蛋白标准加入双缩脲试剂后,如果发现检测效果不佳,可以室温放置1h或60℃放置15min,颜色会随着时间的延长不断加深。显色反应也会随温度升高而加快。
2、 检测中发现所有孔都呈暗紫色,可能原因是样品含有还原剂,应适当透析或稀释样品。
3、 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。