乙酰胆碱酯酶染色液(亚铁氰化铜法)

产品简介：

胆碱酯酶（cholinesterase,ChE）属于特异性酯酶，可分为两大类。一类是乙酰胆碱酯酶(Acetyl cholinesterase,AChE)又称为真性胆碱酯酶，能水解乙酰胆碱，起到生理的；另一类为胆碱酯酶，又称假性胆碱酯酶(Pseudo cholinesterase,PsChE)，能水解胆碱的酯而不能水解乙酰胆碱酯。乙酰胆碱酯酶主要存在于神经元的胞质内、神经与肌肉接头处即所谓运动终板处；PsChE主要存在于血浆、胰腺、唾液腺内，生理功能尚不明确。

乙酰胆碱酯酶染色液(亚铁氰化铜法)属于Karnovsky和Roots法，其染色原理是乙酰胆碱酯酶水解碘化乙酰硫代胆碱，释放乙酸和硫代胆碱。硫代胆碱中的硫氢基（-SH）把铁氰化押还原为亚铁氰化钾，后者与铜离子结合形成不溶性的红棕色至深棕色的亚铁氰化铜沉淀在酶活性部位而显示出来。其优点是操作简便、酯酶的扩散较少，其缺点是对底物对组织的渗透性较差。该染色液可情况下的改变，亦有利于巨症、肠神经元发育异常的诊断。有机农药时可使该酶受到抑制，酶的活性下降而呈阴性反应。

自备材料：

1、 10%甲醛钙固定液

2、 恒温培养箱

3、 光学显微镜

操作步骤（仅供参考）：

1、 冰冻切片，厚6μm，不固定或置于遇冷的10%甲醛钙固定10min。

2、 蒸馏水洗3次，每次1min。

3、 配制AChE孵育液：临用前，取AChE Iodide Buffer加入至AChE Iodide，使后者完全溶解，即为A12混合液，4℃保存。取适量的A12混合液、A3、A4、A5、A6，按A12混合液:A3:A4:A5:A6=1:7:1:1:0.2充分混合，即为AChE孵育液，6h内使用。注意：如果想显示AChE和ChE，即无需区分AChE和ChE，无需加入Iso-OMPA。

4、 切片入预温的AChE孵育液中，37℃避光孵育1~3h（一般不超过6h），至切片呈淡棕色时取出。

5、 蒸馏水洗，镜下观察如活性部位仍较淡，可于蒸馏水洗后再进行孵育，至反应合适为止。

6、 流水冲洗5min。

7、 滴加苏木素染色液浅染细胞核3~5min。

8、 流水冲洗10min。

9、 常规脱蜡透明，中性树胶封固。

阴性对照（可选）：

取配制好的AChE孵育液，按AChE孵育液:AChE-ChE抑制剂=50:1充分混合。取相同切片入含AChE-ChE抑制剂的AChE孵育液中，其余同上，呈阴性反应。

注意事项：

1、 本染色液适用于冰冻切片，同时应减少切片在室温暴露的时间。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。