酸性磷酸酶染色液(硝酸铅法)

产品简介：

酸性磷酸酶（acid phosphatase,ACP）分布极广泛，遍布各种组织，主要存在于细胞的溶酶体内，所以常作为溶酶体标志酶。溶酶体外的酸性磷酸酶存在于内质网和胞质内。各种动物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的适宜pH为4.5~5.5。

酸性磷酸酶染色液以β-甘油磷酸钠为底物，在酸性pH下被酸性磷酸酶水解释放出磷酸盐，遇铅离子则生成磷酸铅沉淀，再被S2+置换，最终生成硫化铅棕黑色沉淀。酸性磷酸酶的一般抑制剂为氟化物、磷酸根离子。对某些酸性磷酸酶来讲，Cu2+、酒石酸根离子和四氯化碳以及醛类也都是抑制剂，Mn2+为该酶的激活剂。冰冻切片和石蜡切片均可，但多用冰冻切片。，该染色法对和其他脏器的转移性呈强阳性反应，霍奇金、、、、舌表皮性癌、多核巨细胞瘤的瘤细胞质也呈强阳性反应，Ewing、成等呈阴性反应。

自备材料：

1、 蒸馏水

2、 恒温箱

3、 封片剂

操作步骤（仅供参考）：

（一）冰冻切片染色

1、 冰冻切片至蒸馏水。

2、 切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染15~60min。

3、 入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。

4、 在上述过程中配制ACP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ACP硫化工作液，即配即用,切片入硫化工作液，孵育1~2min。

5、 流水冲洗3~5min，蒸馏水洗。

6、 (可选)核固红复染细胞核，蒸馏水洗。甘油明胶封片。

（二）石蜡切片染色

1、 石蜡切片脱蜡至蒸馏水。

2、 切片入ACP孵育液，置于37℃温箱，浸染4~12h，可以延长至24h。

3、 入37℃蒸馏水中洗2次，每次1min，以去除未被吸附的铅。

4、 在上述过程中配制ACP硫化工作液，即取试剂（B）用蒸馏水稀释50倍，即为ACP硫化工作液，即配即用。切片入硫化工作液，孵育1~2min。

5、 流水冲洗3~5min，蒸馏水洗。

6、 （可选）核固红复染细胞核，蒸馏水洗。

7、 石蜡切片脱水，常规透明，中性树胶封片。

阴性对照（可选）：

将切片置入试剂（C）--ACP对照液中，室温1~2h孵育，其余步骤相同，结果为阴性。

注意事项：

1、 ACP孵育液、ACP硫化液易失效， 分成小分储存。ACP硫化液具有腐蚀性。

2、 对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。

3、 样本需新鲜，取材后应立即处理，否则会影响酶的活性。

4、 组织固定需在4℃冰箱进行，时间不宜超过24h，否则酶活性会减弱或消失。

5、 组织在石蜡包埋时，温度不宜高于56℃。应使用熔点为52~54℃的石蜡进行浸蜡，浸蜡时间要短，否则酶活性会减弱或消失。

6、 不纯的二甲苯会分解黑色沉淀，宜选用AR级以上的二甲苯。